牛ELISA檢測試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中待測物質水平。用純化的待測物質抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入待測物質,再與HRP標記 的待測物質抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終 的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),通過標準曲線計算樣品中待測物質濃度。
1、在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發(fā)和污染,試劑避免受到微生物的污染,因為蛋白水解酶的干擾將導致出現(xiàn)錯誤的結果。
2、小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本/標準品,酶結合物或底物時,第1個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育”時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。
3、試劑盒保存:部分試劑保存于-20℃,部分試劑保存于2-8℃,具體以標簽上的標示為準。
4、濃洗滌液會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
5、剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質,此為正常現(xiàn)象,不會對實驗結果造成任何影響。
6、所有的樣品都應管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。