測(cè)定意義:SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理:通過(guò)黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜,后者在560nm處有吸收;SOD可清除O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應(yīng)液藍(lán)色越深,說(shuō)明SOD活性愈低,反之活性越高。
需要的儀器,耗材:可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
樣本處理
1. 細(xì)胞、細(xì)菌樣本:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照每 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液, 超聲波破碎(功率 20%或 200w,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次)。8000g 4℃離心 10 分鐘,取上清,置冰 上待測(cè)。
2. 組織樣本:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提 取液),進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。
3. 血清(漿)樣本:直接檢測(cè)。