試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
原理:將抗原與固相載體相連結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。加入特異性一抗與固相抗原相結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,加酶標(biāo)二抗。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)二抗結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,加底物顯色。
優(yōu)點(diǎn):酶標(biāo)二抗可加強(qiáng)信號,提高靈敏度;靈活性更大,同一酶標(biāo)二抗可應(yīng)用于多種不同的一抗;不直標(biāo)一抗,可保留更多的免疫反應(yīng)性;成本更低,使用標(biāo)記抗體更少。
缺點(diǎn):交叉反應(yīng)幾率升高。